人參（Radix Ginseng）為五加科植物人參（Panax ginseng C. A. Mey.）的干燥根，中國(guó)藥典記載，人參性 平，味甘、微苦。歸脾、肺、心經(jīng)。具有大補(bǔ)元?dú)?，?fù) 脈固脫，補(bǔ)脾益肺，生津，安神的功效[1]。根據(jù)傳統(tǒng)用 藥經(jīng)驗(yàn)，人參主根和須根均作為人參入藥，隨著人參炮 制加工方法的發(fā)展，市場(chǎng)上逐漸出現(xiàn)人參主根和須根兩 個(gè)不同的用藥部位，經(jīng)驗(yàn)普遍認(rèn)為人參主根的人參皂甙 含量相高于參須，主根的市場(chǎng)價(jià)格也高于須根。目前研 究人參的藥用部位多為其主根，對(duì)須根的研究比較少。 本研究建立參須中人參總皂苷含量測(cè)定的方法，實(shí)驗(yàn)結(jié) 果表明該方法準(zhǔn)確、快速，為參須的深入研究及質(zhì)量控 制提供了更加可靠的方法。 1 儀器與試藥 1.1 儀器 紫外分光光度計(jì)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器；分析天平（萬(wàn)分之一， ；高速勻漿機(jī) ；恒溫水浴 鍋；超聲波清 洗器；循環(huán)水式 多用真空泵（。 1.2 試藥 參須藥材由廣州中 醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院賴(lài)小平教授鑒定為參須藥材；人參皂 苷 Re 對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)： 11041201）。香草醛（批號(hào)：20100315，）；高氯酸（批號(hào)：20100904，）；冰醋酸（批號(hào)：20090320)；乙醇（批號(hào) 20100806），均為分析純。 2 方法與結(jié)果 2.1 對(duì)照品溶液與供試品溶液的制備 對(duì)照品溶液的 制備：取干燥的人參皂苷 Re 對(duì)照品 6mg，精密稱(chēng)定，置 5ml 容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得 人參皂苷 Re 對(duì)照品儲(chǔ)備液。再精密移取儲(chǔ)備液 2ml 至
10ml 量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得濃度為 0.2412mg/ ml 的人參皂苷 Re 對(duì)照品溶液。 供試品溶液的制備：分別取 20100111 批樣品約 0.05g，0.1g，0.2g，置圓底燒瓶中，加 75%乙醇 50ml， 加熱回流 1.5h，放冷，濾過(guò)，濾渣用乙醇洗滌 2～3 次， 收集濾液，減壓濃縮至無(wú)醇味，用 20ml 的蒸餾水溶解， 轉(zhuǎn)移至分液漏斗中。萃取 3 次（20ml/10ml/5ml）， 棄去層。水層加入水飽和正丁醇萃取 4 次 （30ml/20ml/15ml/10ml），合并正丁醇萃取液，減壓回 收正丁醇至干，用甲醇分次洗滌、轉(zhuǎn)移至 25ml 容量瓶 中，甲醇定容。 2.2 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇 精密吸取人參皂苷 Re 對(duì)照品溶 液 0.6ml，加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml，在 60℃下水浴加熱 15min，冰水冷卻 10min，加 入冰醋酸 5ml，搖勻即得待測(cè)定對(duì)照品溶液[4]。同時(shí)取供 試品溶液 0.6ml，按待測(cè)對(duì)照品溶液的顯色方法進(jìn)行顯色 制備即得待測(cè)定供試品溶液。 照紫外-可見(jiàn)分光光度法（2010 版藥典附錄 V A ）[5] 測(cè)定。結(jié)果：人參皂苷與香草醛-高氯酸試劑顯色后，于 540-560nm 處有明顯紫外吸收，而且在 555nm 處有大 吸收，所以選擇測(cè)定波長(zhǎng)為 555nm。
2.3 線(xiàn)性關(guān)系考察 精密吸取人參皂苷 Re 對(duì)照品溶液 0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml、0.7ml 、0.8ml，水 浴蒸干，加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml，在 60℃下水浴加熱 15min，冰水冷卻 10min，加 入冰醋酸 5ml，搖勻[2]，于波長(zhǎng) 555nm 處測(cè)定各溶液的吸光度。以人參皂苷 Re 重量(mg)為橫坐標(biāo)，以吸光度為 縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示人參皂苷在 24.12～193.00μg 范圍內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，相關(guān)系數(shù) r 為 0.9996，回歸方程為 Y=4.997X+0.002809。 2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取濃度為 0.2412mg/ml 人參皂 苷 Re 對(duì)照品溶液 0.6ml，加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml，在 60℃下水浴加熱 15min，冰水 冷卻 10min，加入冰醋酸 5ml，搖勻，于 555nm 處連續(xù) 測(cè)定吸光度 5 次。結(jié)果測(cè)定值的 RSD 為 1.8%，提示儀 器精密度良好。 2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取 20100111 批樣品約 0.1g，精密稱(chēng) 定，按“2.1”項(xiàng)中供試品溶液的制備方法制備，精密量 取 0.3ml，加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml，在 60℃下水浴加熱 15min，冰水冷卻 10min，加 入冰醋酸 5ml，搖勻，在顯色后 20min、25min、30min、 35min、45min、60min，于 555nm 處測(cè)定吸光度。結(jié)果 顯示：在 60min 內(nèi)測(cè)定值的 RSD 為 1.5%，表明溶液在 1h 內(nèi)穩(wěn)定，故本實(shí)驗(yàn)確定在顯色后 1h 內(nèi)測(cè)定。 2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取 20100111 批樣品約 0.1g ，取 6 份， 精密稱(chēng)定，按“2.1”項(xiàng)中供試品溶液的制備方法制備。 分別精密量取供試品溶液各 0.3ml，水浴蒸干，加入 5% 的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml，在 60℃下水浴 加熱 15min，冰水冷卻 10min，加入冰醋酸 5ml，搖勻， 于 555nm 處測(cè)定吸光度，計(jì)算各份供試品溶液中人參皂 苷含量。結(jié)果參須中人參總皂苷含量為 81.47mg/g，SD 為 2.0，RSD 為 2.5%，提示本試驗(yàn)重復(fù)性良好。 2.7 加樣回收率試驗(yàn) 人參皂苷 Re 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制 備：精密稱(chēng)取人參皂苷 Re 對(duì)照品 0.04004g，置 10ml 容 量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得濃度為 4.004mg/ml 的 人參皂苷 Re 對(duì)照品溶液。 取 20100111 批樣品約 0.05g，6 份，精密稱(chēng)定，再 分別精密量取人參皂苷 Re 對(duì)照品儲(chǔ)備液 1ml，按照供 試品制備方法制備，分別精密量取供試品溶液 0.3ml， 水浴蒸干，加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml，在 60℃下水浴加熱 15min，冰水冷卻 10min，加 入冰醋酸 5ml，搖勻，于 555nm 處測(cè)定吸光度，計(jì)算每 份溶液人參總皂苷含量。結(jié)果表明平均加樣回收率為 102.3%，RSD 為 2.8%，提示該測(cè)定方法準(zhǔn)確度高，結(jié) 果見(jiàn)表 1。 號(hào)為 20100111，20100823，20100824 參須藥材約 0.1g， 精密稱(chēng)定，按“2.1”項(xiàng)中供試品溶液的制備方法制備。 分別精密吸取待測(cè)溶液 0.3ml 至刻度試管中，水浴蒸干， 加入 5%的香草醛醋酸溶液 0.2ml 和高氯酸 0.8ml，在 60 ℃下水浴加熱 15min，冰水冷卻 10min，加入冰醋酸 5ml， 搖勻，于 555nm 處測(cè)定吸光度。人參總皂苷百分含量按 干燥品算，依次為 0.81%，1.01%，1.00%，均符合藥典 人參總皂苷不得低于 0.8%的要求，結(jié)果見(jiàn)表 2。
3 討論 本項(xiàng)目以人參總皂苷為指標(biāo)性成分，采用 5%香草醛 -高氯酸對(duì)溶液進(jìn)行顯色處理，顯色的原理為高氯酸使皂 苷的羧基脫水，增加雙鍵結(jié)構(gòu)，再經(jīng)雙鍵位移，雙分子 縮合等反應(yīng)生成共軛雙鍵系統(tǒng)，又在酸的作用下形成陽(yáng) 碳離子鹽而顯色，從而可用紫外-可見(jiàn)分光光度法（比色 法）測(cè)定總?cè)藚⒃碥盏暮俊?本研究采用紫外分光光度法測(cè)定參須中人參皂苷的 含量，該方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好，可以作為參 須中人參皂苷含量的測(cè)定方法。
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